E2F-1截短体的诱饵载体的构建及检测

孔凡彪; 王晓通; 谢玉波; 肖强

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E2F-1截短体的诱饵载体的构建及检测

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目的构建E2F-1截短体的诱饵载体,并进行自激活活性和诱饵蛋白毒性检测,为应用酵母双杂交系统筛选与E2F-1相互作用蛋白建立实验基础.方法设计引物,PCR扩增E2F-1截短体,引入酶切位点EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ,将E2F-1截短体连接至载体pGBKT7中,将构建成功的诱饵表达载体pGBKT7-E2F-1截短体转化到酵母菌AH 109中,采用选择性培养皿和β-半乳糖苷酶分析等方法分析检测重组质粒的自激活活性和细胞毒性.结果成功扩增了E2F-1截短体,并连接至载体pGBKT7中,测序比对结果正确,成功转化到酵母菌AH 109中,经检测无自激活活性和细胞毒性.结论成功构建了E2F-1截短体的诱饵载体,经检测无自激活活性和细胞毒性,可应用于酵母双杂交系统筛选与E2F-1相互作用的蛋白.

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来源
《广东医学》 |2011年第20期|2635-2637|共3页
作者
孔凡彪; 王晓通; 谢玉波; 肖强;
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作者单位

广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科,南宁,530021;

广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科,南宁,530021;

广西医科大学第一附属医院麻醉科,南宁,530021;

广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科,南宁,530021;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类
关键词
E2F-1截短体; 诱饵表达载体; 酵母双杂交; 自激活;

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