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TGF-β/miRNA/c-Ski在人冠脉内皮细胞中调控内皮-间充质转化的作用机制研究

         
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目的 分析TGF-β、miRNA以及c-Ski于人冠脉内皮细胞调控内皮-间充质转化(End-MT)的作用机制.方法 以人冠状动脉内皮细胞为研究对象,构建基心肌纤维化细胞模型,设置空白对照组,采取0 ng/mL、1 ng/mL、2.5 g/mL及5 ng/mL几种浓度梯度TGF-β1诱导冠脉内皮细胞,经慢病毒c-SKI载体传染细胞与动物,经免疫印迹法对c-SKI于End-MT细胞内的表达情况开展检测,分析过表达C-SKI对于End-MT有关分子标志物影响,结合在线软件及生物信息学分析,筛选可靶向结合c-SKI3'-UTR的microRNA,使用双荧光素酶报告验证其结合及调控关系.结果 不同浓度TGF-β1组作用48 h之后,c-SKI表达呈现剂量依赖性降低,和空白对照组比较,5μg/L组c-SKI表达降低最明显(P＜0.05).和对照病毒感染+TGF-β1组比较,C-SKI基因感染+TGF-β1组冠脉内皮细胞内vimentin与a-SMA蛋白表达明显下降,E-ead蛋白表达升高(P＜0.05).和对照病毒感染+TGF-β1组比较,C-SKI基因感染+TGF β1组p-Smad2与p-Smad3蛋白水平明显下降(P＜0.05).MiR-200a mimics转染后和对照组比较miR-200a表达明显上升(P＜0.05).1 ng/mL、2.5 g/mL及5 ng/mL浓度TGF-β1组与0 ng/mL浓度TGF-β1组对比,CD31与FSP1蛋白表达显著上升;于1 ng/mL、2.5 g/mL浓度TGF-β1组和0 ng/mL浓度TGF-β1组中,miR-200组和对照组比较,其CD31及VEcadherin蛋白表达显著上升(P＜0.05),a-SMA与FSP1蛋白表达显著下降(P＜0.05).结论 于End-MT时C-SKI表达下调,C-SKI过表达可抑制冠脉内皮End-MT,机制可能和对TGF-1β1/Smad信号通路的活性调控相关.miR-200a能抑制End-MT过程,作用机制可能和靶向抑制HMGB1对TGF-β1产生调控作用有关.

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