重叠延伸PCR方法的建立与应用

曹阳; 李冬田; 尹冰楠; 佟惠春

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重叠延伸PCR方法的建立与应用

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目的建立一种新型PCR技术(重叠延伸PCR)并用于腺病毒早期基因E1A与内核蛋白体进入位点IRES(internal ribosome entry site)的直接连接,为构建复制型腺病毒载体作准备.方法以PcAE1A质粒与PIRES-EGFP质粒为模板,通过引物设计,使E1A基因3'端与IRES基因5'端具有相互重叠的一段序列,用该组引物行PCR分别扩增E1A基因与IRES基因,再以这两种PCR产物的混合物作为模板,进行重叠延伸PCR扩增E1A-IRES基因片段.结果经酶切及测序鉴定重叠延伸PCR方法成功构建了E1A-IRES基因片段.结论重叠延伸PCR法能将任意两段DNA序列连接起来,其在分子生物学的领域中具有潜在应用价值.

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来源
《河北医药》 |2005年第11期|803-804|共2页
作者
曹阳; 李冬田; 尹冰楠; 佟惠春;
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作者单位

300070,天津市,天津医科大学微生物教研室;

300070,天津市,天津医科大学微生物教研室;

300070,天津市,天津医科大学微生物教研室;

300070,天津市,天津医科大学微生物教研室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类临床医学;
关键词
重叠延伸聚合酶链式反应; 腺病毒载体;

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