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全合成3α-羟类固醇脱氢酶基因密码子优化及酶性质研究

         

摘要

以NCBI报道的Comamonas testosteroni ATCC11996中3α-羟类固醇脱氢酶基因(3α-hydroxysteroid dehydrogenase gene,3α-hsd,AF092031.2)为模板,通过改变碱基序列但不影响酶的氨基酸序列,将该基因相对于大肠杆菌的密码子适用指数由0.78提高到0.87,GC含量由原来的63.17降低到56.46,大幅度减少了GC簇及寡聚A和T局域的存在,提高 3α-hsd的可表达性.全合成基因定向克隆到pET28a载体中,并转化至大肠杆菌B12l(DE3)中表达.采用乳糖诱导后,SDS-PAGE检测在约27 kD处有一高效表达的蛋白条带.采用Ni螯合柱分离纯化3α-HSD,获得了较高纯度及较高的产率.酶学性质初步分析表明,全基因合成表达的3α-HSD的性质与原始的3α-HSD基本相同.

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