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金雀异黄素对永生化人晶状体上皮细胞系HLEC-B3细胞增殖和周期的影响

         
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目的:研究金雀异黄素(genistein,Gen)抑制人类晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)增殖的机制.方法:流式细胞仪检测不同浓度Gen作用12,24,48,72h后对人晶状体上皮细胞周期及凋亡的影响.逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测细胞周期蛋白D1、P53及P21的mRNA表达;Western blot法检测细胞周期蛋白D1和P53及P21的蛋白表达.结果:流式细胞仪检测结果显示随Gen浓度的增大,S期细胞明显增多,细胞阻滞在S期.各浓度Gen作用12,24h诱导凋亡不明显,处理48h后12.5mg/L浓度组出现凋亡峰,50mg/L浓度组凋亡明显.处理72h,6.25mg/L浓度组凋亡达12.7%,12.5mg/L浓度组凋亡达51.8%,25mg/L浓度组凋亡达59.3%.RT-PCR检测结果显示随金雀异黄素浓度逐渐增高,晶状体上皮细胞P21mRNA的表达逐渐下调,cyclinD1的mRNA表达水平上调,p53的mRNA表达水平一致.Western blot法检测结果:随Gen作用浓度增加P21蛋白表达逐渐减少,CyclinD1蛋白表达水平逐渐增高,P53蛋白表达处理组与对照组之间表达有显著差异(P＜0.01),但各处理组间无显著差异.结论:Gen能够抑制HLEC的增殖,是细胞周期阻滞和细胞凋亡共同作用的结果,在诱导细胞凋亡前它使细胞阻滞在S期,机制可能与Gen引起P21的表达降低有关,而且这种降低是非依赖P53途径的.

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