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冷诱导RNA结合蛋白基因(CIRP)在牦牛睾丸不同发育时期的表达和定位研究

     
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冷诱导RNA结合蛋白(cold-inducible RNA-binding protein,CIRP)是目前哺乳动物中被广泛研究的冷应激蛋白之一.本研究通过分析CIRP在牦牛(Bos grunniens)睾丸不同发育阶段的表达变化,探究其在牦牛睾丸发育过程中所发挥的功能,为进一步阐明CIRP在高原哺乳动物精子发生调节过程的作用机制提供相关数据.本实验采用RT-PCR法克隆牦牛CIRP基因序列(KF682140),通过实时荧光定量RTPCR (quantitative Real-time,qRT-PCR)、Western blot及免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(strept avidin-biotin complex,SABC)技术检测1日龄、5月龄、1岁及3岁牦牛睾丸CIRP mRNA及蛋白的表达.RT-PCR反应扩增得到牦牛CIRP mRNA序列编码区长为642 bp,编码213个氨基酸,编码蛋白大小约为23 kD,与家牛有较高的同源性.qRT-PCR和Westem blot实验结果显示,在mRNA及蛋白水平CIRP在各年龄牦牛睾丸中均有表达,且随着年龄的增长呈上升趋势.免疫组织化学染色结果表明,1日龄牦牛睾丸曲精小管上皮观察到较弱免疫阳性反应,阳性细胞为精原细胞;5月龄曲细精管上皮CIRP表达较丰富,阳性细胞仍为精原细胞;1岁曲细精管上皮出现初级精母细胞,并与精原细胞表达阳性;3岁牦牛睾丸发育成熟,曲精小管内精原细胞和初级精母细胞的胞核强阳性表达.综上所述,牦牛睾丸中CIRP表达量随年龄增长而变高,这提示CIRP可能对牦牛睾丸发育及生精细胞的增殖分化具有调控和保护作用.

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