人SUMO1基因的真核表达载体构建及其RNA干扰靶点筛选

吴勇延; 肖亮; 单黎然; 宋振; 郭泽坤

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人SUMO1基因的真核表达载体构建及其RNA干扰靶点筛选

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[目的]构建人SUMO1的真核表达载体,筛选SUMO1的有效干涉靶点.[方法]将SUMO1亚克隆至载体pCMV-HA中.寻找可能的干涉位点,合成上下游引物,退火后直接克隆入GFP-HU双启动子载体.用Western Blot和细胞荧光的方法检测各载体对外源性SUMO融合蛋白表达的影响,其后检测对内源性SUMO1表达的敲降效果.[结果]构建的人SUMO1真核表达载体pCMV-HA-SUMO1测序正确.针对267、279、293、309、342、386等不同干涉靶点构建双启动子干扰载体,其中293位点的干涉载体在Western Blot和荧光检测试验中均表现出稳定的敲降效果,抑制了SUMO1的表达.[结论]该研究成功构建了SUMO1的真核表达载体及具有明显敲降效果的干涉载体,可为后续研究奠定基础.

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来源
《安徽农业科学》 |2010年第29期|16134-16137|共4页
作者
吴勇延; 肖亮; 单黎然; 宋振; 郭泽坤;
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作者单位

西北农林科技大学生命科学学院;

陕西杨凌;

712100;

西北农林科技大学生命科学学院;

陕西杨凌;

712100;

西北农林科技大学生命科学学院;

陕西杨凌;

712100;

第四军医大学航空航天医学系生理教研室;

陕西西安;

710032;

西北农林科技大学生命科学学院;

陕西杨凌;

712100;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类农业生物工程;
关键词
SUMO1; RNA干涉; 双启动子载体;

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