淡紫拟青霉丝氨酸蛋白酶基因克隆表达及抗血清的制备

蒋桂芳; 宋力; 黄俊生

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淡紫拟青霉丝氨酸蛋白酶基因克隆表达及抗血清的制备

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[目的]探索利用大肠杆菌进行丝氨酸蛋白酶PL基因的克隆与表达及抗血清制备的方法.[方法]根据报道的PL蛋白基因序列设计1对引物,通过RT-PCR扩增获得PL基因片段,对重组载体进行构建、鉴定和序列分析,用表达的特异蛋白条带制备抗原,免疫家兔制备抗血清.[结果]通过RT-PCR扩增得到长约850 bp的PL基因片段,将其克隆到原核表达载体pET-22b(+)中,获得的重组子pET-22b-PL转化E.coli B121(DE3),经最终浓度为1 mmol/L IPTC诱导37℃培养4 h,获得约31 kDa大小的重组蛋白.sDs_PAGE电泳分析表明,该蛋白表达量占菌体总蛋白的60%,说明该蛋白得到了高效表达.用表达的特异蛋白条带制备的免疫家兔制备抗血清,经ELISA测定效价为1/10 000.[结论]通过基因重组可获得PL基因在大肠杆菌中的高效表达蛋白,且该蛋白具有较高的免疫活性.

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来源
《安徽农业科学》 |2008年第25期|10783-1078410814|共3页
作者
蒋桂芳; 宋力; 黄俊生;
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作者单位

重庆文理学院生命科学系;

重庆;

402160;

重庆文理学院生物化学与环境科学系;

重庆;

402160;

中国热带农业科学院环境与植物保护研究所;

海南儋州;

571737;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因载体;
关键词
淡紫拟青霉菌; PL基因; 原核表达; 抗血清; ELISA;

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