棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒HaSNPV orf101的原核表达及抗体制备

李志远; 邱小慧; 周玥; 钱丽莹; 徐旭士

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[目的]摸索棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒(HaSNPV)orf101编码蛋白原核表达条件并制备其多克隆抗体.[方法]根据HaSNPV-orf101序列,设计引物,引入适当的酶切位点,利用PCR扩增出基因片段并将其克隆至pGEM-T Easy载体,然后亚克隆至原核表达载体pGEX-KG,检测在不同条件下融合蛋白的表达产量及其折叠性质.原核表达产物经SDS-PAGE分离纯化,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.[结果]在IPTG诱导的条件下,融合蛋白GST- HA101可在大肠杆菌BL21中以包涵体形式高效表达,表达产物的大小为55.8 kDa.制备的多克隆抗体经1:8000倍稀释后用于Western Blot分析,获得特异性显色信号.[结论]原核表达蛋白及其多克隆抗体的获得为深入研究Ha101的基因功能打下了基础.

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来源
《安徽农业科学》 |2008年第35期|15391-1539315396|共4页
作者
李志远; 邱小慧; 周玥; 钱丽莹; 徐旭士;
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作者单位

南京师范大学生命科学学院;

江苏南京210046;

南京师范大学生命科学学院;

江苏南京210046;

南京师范大学生命科学学院;

江苏南京210046;

南京师范大学生命科学学院;

江苏南京210046;

南京师范大学生命科学学院;

江苏南京210046;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类农业生物工程;
关键词
棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒; orf101; 克隆; 表达; 抗体;

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