TAIL-PCR方法扩增稀有放线菌小单孢菌中ΦC31的attB序列研究

杨梦莹; 龙慈凡; 李晓华

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TAIL-PCR方法扩增稀有放线菌小单孢菌中ΦC31的attB序列研究

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[目的]为了研究链霉菌噬菌体諧31在小单孢菌40027菌株中的整合位点序列.[方法]以20 ng整合质粒pSET152的小单孢菌40027菌株基因组DNA为模板,利用3个特异性巢式引物(PF1、PF2和PF3)与随机引物AD2,通过热不对称交错PCR(TAIL-PCR)扩增稀有放线菌小单孢菌中Φ31的attB序列,用1%琼脂糖凝胶电泳来检测扩增产物的大小.[结果] 扩增结果表明,第三轮扩增产物250 bp左右的条带比第二轮对应带略小,第二轮扩增产物对应带比第一轮对应带略小,与3个特异性巢式引物预期扩增结果相符,第三轮扩增产物250 bp左右那一条带为阳性带, 经回收后,进行克隆并测序.序列分析表明:该阳性带包含Φ31在小单孢菌40027菌株中的attB序列.[结论] TAIL-PCR方法为attB序列的克隆提供了一种简便、高效的新方法.

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来源
《安徽农业科学》 |2007年第22期|67296732|共2页
作者
杨梦莹; 龙慈凡; 李晓华;
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作者单位

中南民族大学生命科学学院国家民委生物技术重点实验室;

湖北武汉;

430074;

中南民族大学生命科学学院国家民委生物技术重点实验室;

湖北武汉;

430074;

中南民族大学生命科学学院国家民委生物技术重点实验室;

湖北武汉;

430074;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类生物工程学（生物技术）;
关键词
小单孢菌40027菌株; TAIL-PCR; attB序列;

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