产物可直接进行'TA'克隆的高保真PCR法

孙达权; 张钦真; 胡桐; 湛钊; 石松; 薛殿婷

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产物可直接进行'TA'克隆的高保真PCR法

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cqvip:[目的]介绍一种PCR产物直接进行“TA”克隆的高保真PCR法,减少高保真PCR产物“TA”克隆的中间步骤。[方法]Trizol法提取人肝癌细胞SMMC-7721总RNA,并将mRNA反转录成cDNA。以cDNA为模板,联合不同特性的Taq DNA聚合酶扩增PKC基因的蛋白编码区。PCR产物经纯化后进行“TA”克隆、细菌转化、筛选培养、质粒抽提、酶切鉴定和测序鉴定等。[结果]高保真DNA聚合酶扩增的PCR产物未发现DNA突变,但不能直接进行“TA”克隆。Taq DNA聚合酶扩增的产物可直接进行“TA”克隆,但其内部存在多个突变位点,保真性明显不足。联合使用高保真DNA聚合酶和Taq DNA聚合酶(双酶联用)扩增的PCR产物可直接进行“TA”克隆,且DNA测序未发现突变。[结论]双酶联用PCR可以获得高保真PCR产物,并直接进行“TA”克隆。

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来源
《安徽农业科学》 |2020年第5期|109-111116|共4页
作者
孙达权; 张钦真; 胡桐; 湛钊; 石松; 薛殿婷;
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作者单位

贵州医科大学基础医学院贵州贵阳550025;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
聚合酶链式反应; DNA聚合酶; "TA"克隆; DNA突变;

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