重组毕赤酵母植酸酶N-糖基化位点质谱鉴定

张琪; 吴秀菊; 俞婷; 王志林; 崔百元; 朱庆锋; 贝锦龙

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为系统评估重组毕赤酵母植酸酶的N-糖基化充分性,建立了一种通过联用高效液相色谱-串级质谱来分析植酸酶氨基酸序列及N-糖基化位点的技术.分别发酵了3株基因组已整合不同植酸酶基因的毕赤酵母.发酵液上清经离子交换与凝胶过滤后获得纯化的植酸酶.使用PNGase F或Endo H脱糖基化酶处理植酸酶后,用胰蛋白酶消化脱糖基化产物.通过纳升级高效液相色谱分离胰蛋白酶切产生的肽段混合物.并在联用的串级质谱上进行肽段测序与N-糖基化位点鉴定.结果显示3种植酸酶蛋白的可检测序列覆盖率均在69%以上,且与文献报道不同,均存在糖基化位点修饰不充分的现象.本实验结果证明了高效液相色谱-串级质谱联用法检测植酸酶N-糖基化位点的有效性,并为植酸酶的糖基化研究提供了新的基础.

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来源
《华中师范大学学报：自然科学版》 |2018年第5期|678-685|共8页
作者
张琪; 吴秀菊; 俞婷; 王志林; 崔百元; 朱庆锋; 贝锦龙;
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作者单位

广东省农业科学院农业生物基因研究中心;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类水解酶;
关键词
植酸酶; N-糖基化; 质谱; 毕赤酵母;

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