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中国计量法治完善研究-以《计量法》的修订为核心褐飞虱KCTD3基因克隆、序列分析及其时空表达研究

         
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目的:克隆褐飞虱钾通道蛋白KCTD3基因,并研究其序列特征和时空表达情况,以更好地了解褐飞虱KCTD3在褐飞虱生长发育中的作用,为防治褐飞虱提供理论依据。方法:通过PCR扩增褐飞虱KCTD3基因,运用生物信息学方法对褐飞虱KCTD3基因序列进行分析;之后采用荧光定量PCR(qPCR)检测KCTD3基因在褐飞虱不同生长发育时期(1~5龄若虫和1~9日龄雌成虫)和不同组织(胸部、卵巢、脂肪体、头部和肠道)中的表达情况。结果:褐飞虱KCTD3基因开放阅读框长度为2139 bp,编码712个氨基酸残基,预测蛋白相对分子质量为78200 u,等电点为7.6,包含有一个BTB保守结构域,无信号肽。系统进化树显示,褐飞虱KCTD3与半翅目茶翅蝽Halyomorpha halys和绿盲蝽Apolygus lucorum的KCTD3亲缘关系最近。qPCR结果显示,褐飞虱KCTD3在褐飞虱发育的所有阶段均有表达且在雌成虫中高水平表达,KCTD3在若虫时期表达量较为稳定,而在3日龄成虫中的表达量最高;组织表达分析表明,褐飞虱KCTD3在各组织中均有表达,且在卵巢中的表达量明显高于其他组织,在脂肪体中的表达量最低。结论:本研究成功克隆了褐飞虱KCTD3基因,明确了KCTD3的序列特征和时空表达模式,结果暗示KCTD3在褐飞虱的生长发育和生殖中起重要作用。

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