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荧光定量PCR评价铜绿假单胞菌感染的实验研究

         

摘要

目的探讨FQ-PCR定量检测铜绿假单胞菌oprI基因的方法在快速诊断铜绿假单胞菌败血症,及快速判定抗生素体内疗效中的作用。方法⑴制备不同浓度的标准菌株并行药敏实验,找出敏感药物(丁胺卡那霉素)及非敏感药(苯唑西林钠)。⑵SD大鼠120只随机分为5组,分别取不同浓度的菌液尾静脉注入,于实验开始0h、12h、24h、48h各组分别麻醉6只大鼠,采血作血培养、FQ-PCR。⑶SD大鼠72只随机分为治疗组、处理组和对照组,均给予1×109CFU/ml尾静脉注入。随后治疗组立即给予敏感抗生素;处理组立即给予非敏感抗生素;对照组同时给予等量生理盐水,均于尾静脉注入。各组于首次注射后0h、12h、24h、48h分别麻醉6只大鼠,采血作血培养、FQ-PCR。结果⑴1×109CFU/ml、1×108CFU/ml组各时间段血培养均为阳性,FQ-PCR检测,均为阳性。⑵1×107CFU/ml、1×106CFU/ml组0h、12h血培养均为阳性,1×107CFU/ml组24h血培养为阳性,48h为阴性,而1×106CFU/ml组24h、48h血培养均为阴性。FQ-PCR检测1×107CFU/ml组0h、12h、24h为阳性,48h为阴性。1×106CFU/ml组0h、12h、为阳性24h、48h为阴性。⑶1×105CFU/ml组各时间段血培养均为阴性,FQ-PCR检测均为阴性。⑷处理后对照组、处理组各时间段血培养均为阳性,而处理后治疗组各时间段血培养均为阴性。FQ-PCR检测三组各时段均为阳性。结论⑴FQ-PCR诊断铜绿假单胞菌败血症与传统细菌培养比较其特异性吻合率达100%,虽灵敏度并未增加,但诊断时间明显缩短。⑵有效抗生素治疗后,运用FQ-PCR诊断灵敏度明显高于细菌培养。⑶利用FQ-PCR检测铜绿假单胞菌oprI基因的拷贝数的变化可能有助于抗生素体内敏感性的判断。

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