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Tet-on和Cre/loxP双调控肝靶向表达Cre重组酶转基因小鼠的制备和功能评价

         
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摘要

Objective To construct and evaluate transgenic mice rtTALAP-l/LC-1 target expressing Cre recombinase in liver under regulation of Tet-on and Cre/loxP systems, to lay the foundation for construction of HCV transgenic mice model which can break the embryo stage immunotolerance under dual regulation systems. Methods Mating transgenic mice rtTALAP-1 and LC-1 to acquire offspring mice rtTALAP-1/LC-1, rtTA element and Cre gene fragment of them were detected by PCR analysis. Double positive rtTALAP-1/LC-1 mice were induced by dox for one week, then luciferase signal of mice liver were detected by small animal living body image-forming system and Cre recombinase expression in liver tissue etc. were detected by immunoi histecbemistry subsequently. Results Experimental results showed that clear iuciferase signal can be detected only in liver of rtTALAP-l/LC-1 mice after dox induction by small animal living body image-forming system. Immuno-histochemistry experiment results also showed that Cre recombinase expression only can be detected in liver of rtTALAP-1/LC-1 mice, on the contrary Cre expression can not be detected in heart, kidney, skeletal muscle and other tissue of rtTALAP-1/LC-1 mice. Conclusion Transgenic mice rtTALAP-l/LC-1 were constructed successfully, the liver targeting and induced reaction of expression of targeted gene were very good as well.The above research has laid a solid foundation for construction of HCV transgenic mice model which can break the embryo stage immunotolerance under dual regulation systems.%目的 制备Tet-on和Cre/loxP系统双重调控下肝靶向性表达Cre重组酶的转基因小鼠rtTALAP-1/LC-1并评价其功能,为最终建立可突破胚胎期免疫耐受的双调控型HCV转基因小鼠模型奠定基础.方法 选取适龄rtTALAP-1转基因小鼠与LC-1转基因小鼠交配,PCR法检测子代rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠基因组中是否插入了rtTA元件和Cre基因片段.双阳性rtTALAP-1/LC-1小鼠dox诱导1周后,以小动物活体成像系统检测小鼠肝脏的Luc萤光素酶信号,免疫组化检测Cre重组酶在小鼠肝脏等组织中的表达状况.结果 rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠在dox诱导后,仅在其肝脏检测到清晰的Luc莹光素酶信号,而其他脏器均未检测到萤光信号;免疫组化法也仅在小鼠肝细胞核中检测到Cre重组酶的表达,心脏、肾脏和骨骼肌等其他组织均未检测到Cre重组酶的表达.结论 成功制备了rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠,其靶基因表达的诱导反应性和肝靶向性均良好,为最终制备双调控型丙型肝炎病毒(HCV)转基因小鼠模型奠定了良好的基础.

著录项

  • 来源
    《临床肝胆病杂志》 |2011年第1期|81-83|共3页
  • 作者

    赵亚; 康健; 招明高; 汪爱勤; 尹文; 马玉; 黄豫晓; 兰海云; 孙梦宁; 吕欣; 杨敬; 雷迎峰; 张建敏;

  • 作者单位

    第四军医大学基础部微生物学与病原生物学教研室,西安710032;

    第四军医大学基础部微生物学与病原生物学教研室,西安710032;

    第四军医大学基础部第四军医大学药学系药理教研室,西安710032;

    第四军医大学基础部中心实验室,西安710032;

    第四军医大学基础部中心实验室,西安710032;

    第四军医大学基础部微生物学与病原生物学教研室,西安710032;

    第四军医大学基础部微生物学与病原生物学教研室,西安710032;

    第四军医大学基础部微生物学与病原生物学教研室,西安710032;

    第四军医大学基础部微生物学与病原生物学教研室,西安710032;

    第四军医大学基础部微生物学与病原生物学教研室,西安710032;

    第四军医大学基础部微生物学与病原生物学教研室,西安710032;

    第四军医大学基础部微生物学与病原生物学教研室,西安710032;

    第四军医大学基础部微生物学与病原生物学教研室,西安710032;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 丙型肝炎（非甲非乙型肝炎）;基因工程的应用;
  • 关键词

    肝炎病毒属; 小鼠,转基因; 免疫耐受;

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