微小RNA-7调节脑源性神经营养因子/α-突触核蛋白轴对帕金森病细胞模型细胞凋亡的影响

李云; 单艳华; 刘永萍; 赵鹏

摘要

目的探讨微小RNA(miR)-7调节脑源性神经营养因子(BDNF)/α-突触核蛋白(α-syn)轴对帕金森病(PD)细胞模型细胞凋亡的影响。方法采用6-羟多巴胺注射法构建PD大鼠模型并体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y,用1-甲基4-苯基吡啶离子(MPP^(+))诱导细胞从而建立PD细胞模型。qRT-PCR检测PD大鼠模型左侧黑质组织及PD细胞模型中miR-7、BDNF和α-syn mRNA表达水平。对SH-SY5Y细胞进行转染并分为对照组、MPP^(+)组、MPP^(+)+miR-NC组、MPP^(+)+miR-7 mimics组、MPP^(+)+si-NC组、MPP^(+)+si-BDNF组、miR-NC组、miR-7 mimics组、anti-miR-NC组、anti-miR-7组、MPP^(+)+miR-7 mimics+pcDNA组和MPP^(+)+miR-7 mimics+pc-BDNF组。流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting检测BDNF、α-syn、线粒体融合蛋白(Mfn2)、核呼吸因子1(NRF1)、微管相关蛋白轻链3(LC3)Ⅰ、LC3Ⅱ、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved caspase)-3表达;双荧光素酶报告实验验证miR-7与BDNF的靶向关系。结果与对照组相比,模型组大鼠脑黑质组织中miR-7、α-syn mRNA水平明显减少,BDNF mRNA明显增加(均P<0.05)。与对照组相比,MPP^(+)组细胞凋亡率及LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显升高(均P<0.05),miR-7与α-syn、Bcl-2、Mfn、NRF1蛋白表达水平均显著降低(均P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示,miR-7直接负调控BDNF表达(P<0.05)。过表达miR-7或BDNF沉默表达后,模型细胞凋亡率及BDNF、LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平显著下降,Bcl-2、Mfn、NRF1蛋白表达水平显著升高(均P<0.05);抑制miR-7表达后,细胞凋亡率及Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高,Bcl-2蛋白表达水平明显降低(均P<0.05)。BDNF过表达逆转了miR-7过表达对PD细胞模型细胞凋亡率、凋亡相关蛋白及线粒体自噬相关蛋白的抑制作用(均P<0.05)。结论miR-7过表达能够通过靶向下调BDNF表达,进而抑制α-syn表达,降低PD细胞模型的细胞凋亡。

微小RNA-7调节脑源性神经营养因子/α-突触核蛋白轴对帕金森病细胞模型细胞凋亡的影响

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