奶山羊乳铁蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

钟玉玲; 代邦国; 杜伟伟; 张华文; 李纯; 史怀平

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奶山羊乳铁蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

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为了制备奶山羊乳铁蛋白的多克隆抗体,为进一步的试验提供材料,该研究运用软件分析并选取最适合原核表达的LF序列进行扩增,将扩增出的序列与pET-32a(+)质粒连接,形成原核表达质粒pET-32a-LF,将质粒转化入大肠杆菌,在最适条件(37℃、0.5 mmol/L IPTG、4 h)下诱导表达出大量蛋白。通过Ni-NTA Resin法将蛋白纯化后皮下注射4月龄新西兰大耳兔,免疫注射结束后采集抗体血清,并用间接酶联免疫吸附法和免疫印迹法检测多抗的效价及特异性。结果显示克隆得到适合原核表达的279 bp的LF CDS片段,pET-32a(+)-LF原核表达载体成功构建并顺利表达(未形成包涵体),表达的截短蛋白大小为10 kD。抗体效价达到1:10^(7);免疫印迹试验结果显示,原核表达的LF蛋白和山羊乳腺上皮细胞中的LF蛋白能够被该抗体特异性识别。

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来源
《家畜生态学报》 |2022年第2期|13-19|共7页
作者
钟玉玲; 代邦国; 杜伟伟; 张华文; 李纯; 史怀平;
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作者单位

西北农林科技大学动物科技学院;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
奶山羊; 乳铁蛋白(LF); 抗体制备;

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