罗湖病毒(TiLV)RT-qPCR方法的建立

徐淑菲; 朱黄鑫; 曾韵颖; 刘启霖; 方成俊; 林双庆; 孔凡德

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罗湖病毒(TiLV)RT-qPCR方法的建立

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研究根据罗湖病毒(Tilapia lake virus,TiLV)编码RNA聚合酶的基因片段1设计1对特异性引物和探针,建立一种检测TiLV的实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)方法,并对该检测方法进行了反应体系和条件优化。结果表明,优化的20μL反应体系:2×Probe RT-PCR Master Mix 10μL,QN Probe RT-Mix 0.2μL,5μmol/L的引物TiLV-qF、TiLV-qR、探针TiLV-qP各1μL,模板1μL,补充RNase-free water至20μL。优化的反应条件:反转录45℃20 min;预变性95℃5 min;扩增95℃15 s,60℃1 min,40个循环。荧光收集设置在60℃退火延伸时进行。本文建立的RT-qPCR方法检测TiLV的特异性好,重复性好,灵敏度高,灵敏度为2.5×10^(-8) ng/μL,可为TiLV的监测和预防提供技术支撑。

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来源
《渔业研究》 |2022年第2期|154-161|共8页
作者
徐淑菲; 朱黄鑫; 曾韵颖; 刘启霖; 方成俊; 林双庆; 孔凡德;
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作者单位

厦门海关技术中心;

东山海关综合技术服务中心;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类各种鱼的病害、敌害及其防治;
关键词
罗湖病毒(TiLV); 特异性引物; 探针; 实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR);

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