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鱼类神经坏死病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立和应用

         

摘要

根据GenBank中登录的鱼类神经坏死病毒CP基因序列,选择高度保守区域设计引物和TaqMan荧光探针,通过对实时荧光RT-PCR反应条件进行优化,建立了用于检测鱼类神经坏死病毒的实时荧光RT-PCR方法.利用该方法检测鱼类神经坏死病毒及其他多种常见的水生动物RNA病毒,结果只能检测到目的病毒,表明其具有良好的特异性.灵敏性试验发现,其最低检测限可达1.2 pg/gL,的总RNA.与RT-PCR的灵敏度对比试验表明,其敏感度比RT-PCR高100倍.对同一样品进行检测,在组内及组间的变异系数分别为0.9%以及1.5%,证实其重复性极好,并且从抽提核酸到得出结果仅需4h.对临床500份样品进行鱼类神经坏死病毒检测,结果发现有40份阳性样品.这些结果表明,本研究所建立的实时荧光RT-PCR能对鱼类神经坏死病毒进行准确、快速的检测,具有特异性好、灵敏度高的优点,是开展鱼类神经坏死病的临床检测和疫情监测工作的有力工具.[中国水产科学,2008,15(3):506-510]

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