缺刻缘绿藻CDP-乙醇胺:1,2-二酰甘油乙醇胺磷酸转移酶的基因特征与功能鉴定

焦建璐; 封兵; 毕燕会; 周志刚

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运用反转录PCR与5’-及3’-末端快速扩增技术,从缺刻缘绿藻（Myrmecia incisa Reisigl） H4301中克隆到胞苷二磷酸（CDP）-乙醇胺:二酰基甘油乙醇胺磷酸转移酶（EPT）的基因MiEPT。其cDNA序列全长1914 bp,其中, 5’-非翻译区（UTR）长217 bp, 3’-UTR长533 bp,开放阅读框（ORF）长1164 bp,编码由387个氨基酸组成的蛋白。以缺刻缘绿藻基因组DNA为模板扩增到该基因的DNA序列,长为2853 bp。这两条序列的比对结果显示, MiEPT含有6个内含子,它们将其ORF分隔成7个外显子。经预测, MiEPT为含有8个跨膜区的膜整合蛋白。多序列比结果显示,MiEPT具有CDP-醇磷脂酰转移酶基序。基于不同物种EPT的氨基酸序列所构建的邻接聚类结果表明, MiEPT与已知功能的莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）EPT聚类在一起,由此推测, MiEPT可以催化磷脂酰乙醇胺（PE）的生物合成。为鉴定MiEPT的基因功能,利用表达载体pET-23a实现了在大肠杆菌中重组表达MiEPT的目的。使用超离心技术,获得部分纯化含重组MiEPT的组分。体外酶促反应的产物经薄层层析分析显示,重组表达的MiEPT具有EPT和胆碱磷酸转移酶（CPT）的活性。经棒状薄层色谱的定量分析,可知MiEPT的EPT酶活性是CPT的10.3倍,从而表明, MiEPT在缺刻缘绿藻中能同时参与PE和磷脂酰胆碱的生物合成,但更倾向利用CDP-乙醇胺生产PE。

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来源
《中国水产科学》 |2021年第2期|123-135|共13页
作者
焦建璐; 封兵; 毕燕会; 周志刚;
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作者单位

1. 上海海洋大学水产种质资源开发利用教育部重点实验室 2. 上海海洋大学国家海洋生物科学国际联合研究中心;

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正文语种 chi
中图分类水产植物学;
关键词
缺刻缘绿藻; 乙醇胺磷酸转移酶（EPT）; 胆碱磷酸转移酶（CPT）; 磷脂酰乙醇胺（PE）; 磷脂酰胆碱（PC）; 膜蛋白;

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