山乌桕叶片DNA提取及ISSR-PCR反应体系优化

黄旭萍; 黄一航; 黄敏; 王建超; 陈孝丑; 陈发兴

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山乌桕叶片DNA提取及ISSR-PCR反应体系优化

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为研究南方优良乡土彩叶树种山乌桕的遗传多样性,并为山乌桕种质培育研究提供技术参考。以山乌桕叶片为试验材料,对山乌桕ISSR-PCR反应体系进行优化,比较试剂盒法、改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和十二烷基硫酸钠(SDS)法对山乌桕叶片DNA的提取效果,并利用单因素试验和L 25(53)正交试验对DNA模板用量、引物浓度、2×Taq Master Mix添加量、退火温度和循环次数进行优化。结果表明,试剂盒法和改良CTAB法均可获得较高浓度和质量的DNA,都是提取山乌桕叶片DNA的良好方法;山乌桕叶片ISSR-PCR反应体系中,DNA模板用量对扩增效果影响最大,2×Taq Master Mix添加量的影响最小;山乌桕叶片ISSR-PCR的最优反应体系为:总体积20μL,其中含20 ng DNA模板1.5μL、2×Taq Master Mix 8.0μL、引物浓度0.8μmol·L^(-1)。山乌桕叶片ISSR-PCR的反应程序为:94°C预变性5 min、94°C变性30 s、51.9°C退火45 s、72°C延伸90 s、40个循环,72°C延伸10 min、4°C保存。

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来源
《森林与环境学报》 |2021年第2期|P.164-171|共8页
作者
黄旭萍; 黄一航; 黄敏; 王建超; 陈孝丑; 陈发兴;
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作者单位

福建农林大学园艺学院福建福州350002;

福建农林大学园艺学院福建福州350002;

福建农林大学园艺学院福建福州350002;

福建农林大学园艺学院福建福州350002福建省农业科学院果树研究所福建福州350013;

福州植物园福建福州350012;

福建农林大学园艺学院福建福州350002;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类行道树;
关键词
山乌桕; DNA提取; 简单重复序列区间-聚合酶链式扩增反应; 体系优化;

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