人源抗HER2单链抗体/轻链恒定区/鱼精蛋白截短体融合蛋白的基因构建、表达及活性鉴定

王凯; 温伟红; 王涛; 张瑞; 秦炜炜; 雷小英; 杨安钢

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目的:构建人抗HER2单链抗体(ScFv)/人轻链恒定区(Ck)/鱼精蛋白截短体(tP)融合蛋白基因,在大肠杆菌中表达、纯化并分析该融合蛋白的活性.方法:设计引物扩增人抗HER2单链抗体e23sFv基因和轻链恒定区编码序列(Ck),连接成ScFv/Ck片段,人工合成tP序列,连接于ScFv/Ck末端,构建成ScFv/Ck/tP融合基因,将其克隆入原核表达载体pET32a后,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定后,用Ni-NTA螯合层析介质纯化.细胞ELISA分析ScFv/Ck/tP融合蛋白抗原亲合活性,凝胶迁移实验检测ScFv/Ck/tP融合蛋白与DNA的结合活性.结果:成功构建了人抗HER2ScFv/Ck/tP融合基因,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了可溶性表达.表达的ScFv/Ck/tP融合蛋白保持了与抗原的结合活性,同时具有结合DNA的能力.结论:ScFv与Ck,tP融合后,同时具有抗原和DNA结合活性,为该ScFv用于HER2阳性肿瘤的靶向基因治疗奠定了基础.

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来源
《空军军医大学学报》 |2007年第7期|581-584|共4页
作者
王凯; 温伟红; 王涛; 张瑞; 秦炜炜; 雷小英; 杨安钢;
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作者单位

第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室;

第四军医大学基础部免疫学教研室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
人源抗HER2单链抗体; 轻链恒定区; 鱼精蛋白; 基因构建; 活性鉴定;

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