前列腺特异性抗原启动子调控促凋亡基因caspase-7载体的构建及其对前列腺癌细胞的特异性杀伤作用

张更; 王禾; 张波; 于翠娟; 武国军; 秦卫军; 孟艳玲; 王成济; 杨安钢

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目的 :构建前列腺特异性抗原启动子 (PSAP)调控的促凋亡基因caspase 7表达载体并观察其对前列腺癌细胞的促凋亡作用 .方法 :提取基因组DNA ,通过PCR法获得前列腺特异性抗原启动子 (PSAP)基因 ,利用基因重组方法以PSAP替换掉 pCDNA3真核表达载体中的 pCMV启动子 ,构建PSAP pCDNA3载体 .测序正确后 ,将PSAP分别替换绿色荧光蛋白载体pIRES2 EGFP和克隆入带有效应型caspase 7基因的绿色荧光蛋白载体 pIRES2 EGFP Csp7中的pCMV启动子片段 ,分别获得由PSAP启动子调控的绿色荧光蛋白载体和带有效应型Caspase 7基因的真核表达载体PSAP pIRES2 EGFP Csp7.利用脂质体转染法将该载体分别转染至PC 3m(前列腺癌 )、Hep2 (喉癌 )及MC3T3 (正常成纤维 )细胞中 ,通过荧光显微镜观察转染细胞绿色荧光蛋白表达及细胞形态变化 ,免疫组化检测细胞中效应型caspase 7蛋白的表达状况 ,细胞计数观察转染不同表达载体后各类细胞生长变化 .结果 :经酶切鉴定及测序结果证实所构建载体正确 .转染PSAP pIRES2 EGFP Csp7载体后 ,①在PC 3m细胞中可观察到绿色荧光蛋白的表达 ,并可检测到效应型Caspase 7蛋白表达 ,而在Hep2及MC3T3细胞中未观测到绿色荧光 ,②荧光显微镜下可见前列腺癌PC 3m细胞生长受到抑制并出现凋亡细胞形态。

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来源
《空军军医大学学报》 |2003年第8期|711-714|共4页
作者
张更; 王禾; 张波; 于翠娟; 武国军; 秦卫军; 孟艳玲; 王成济; 杨安钢;
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作者单位

第四军医大学西京医院泌尿外科;

第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室;

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正文语种 chi
中图分类前列腺肿瘤;
关键词
前列腺肿瘤; 启动区(遗传学); 脱噬作用; 克隆; 分子;

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