抗前列腺特异抗原重链可变区单域抗体基因的构建及表达

袁建林; 王智; 武国军; 郝晓柯

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抗前列腺特异抗原重链可变区单域抗体基因的构建及表达

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目的　扩增出抗前列腺特异抗原 (PSA)单克隆抗体(MAb)的重链可变区 (VH)单域抗体基因 ,并在大肠杆菌中表达 .方法　从分泌抗 PSA m Ab的杂交瘤细胞系 E4B7中提取总 RNA,经 RT- PCR扩增 VH 单域抗体基因 ,将其克隆到融合蛋白表达载体 p GEX- 4T- 1中进行表达 .结果　 VH 单域抗体基因全长 36 3bp,含起始码和终止码 .将其克隆到p GEX- 4T- 1内 ,转化大肠杆菌 DH5 α,获得高效表达 ,表达量占全菌总蛋白质的 38% ,以包涵体形式存在 .经初步纯化和复性后 ,用谷胱甘肽 (GST)亲和色谱纯化 ,再经凝血酶水解获得抗 PSA VH 单域抗体 .竞争结合抑制实验证明 ,该表达产物具有前列腺癌细胞亲和活性 .结论　构建成功抗 PSA的 VH单域抗体。

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来源
《空军军医大学学报》 |2001年第5期|425-428|共4页
作者
袁建林; 王智; 武国军; 郝晓柯;
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作者单位

第四军医大学西京医院泌尿外科;

第四军医大学基础部生物化学教研室;

第四军医大学唐都医院中心实验室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类免疫分子生物学（免疫化学）;
关键词
前列腺特异抗原; 单域抗体; 克隆; 表达; 重链可变区;

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