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脂质体RNAiMAX介导siRNA转染沉默胰岛素瘤NIT-1细胞血管紧张素Ⅱ1型受体基因的实验研究

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目的:探讨脂质体RNAiMAX能否介导小干扰RNA(siRNA)转染入胰岛素瘤NIT-1细胞并实现血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)的基因沉默,同时评价其细胞毒性.方法:针对AT1R,设计合成3对siRNA序列,转染NIT-1细胞,荧光显微镜下观察RNAiMAX能否介导荧光分子Cy3标记的siRNA转入细胞内,以及不同siRNA浓度对转染效率的影响;Real-time PCR检测AT1R mRNA的相对表达量,计算基因沉默效率并探讨不同干扰序列及干扰时间对其影响;流式细胞仪检测si-AT1R组、脂质体组和空白组的凋亡率.结果:荧光显微镜观察发现,在一定范围内,5个浓度siRNA转染时,细胞荧光强度均达90％以上,以40 nmol/L的荧光强度最高;AT1R的3对序列(si-AT1R-1、si AT1R-2、si AT1R-3)转染24 h沉默效率分别为86.07％、92.20％、74.67％,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),以si-AT1R-2的沉默效率最高,检测其24 h、48 h、72h的沉默效率,显示24 h的沉默效率最高;各组细胞凋亡率比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论:脂质体RNAiMAX可以介导siRNA转入NIT-1细胞中并实现AT1R基因的沉默,40 nmol/L si-AT1R-2转染24 h可达到理想的沉默效果;此方法对细胞基本无毒性作用.

著录项

来源
《广西医科大学学报》 |2016年第5期|770-773|共4页
作者
莫丽雯; 卢德成; 李海滨;
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作者单位

广西医科大学第一附属医院内分泌科南宁 530021;

广西医科大学第一附属医院内分泌科南宁 530021;

中国人民解放军第303医院南宁 530021;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类糖尿病;
关键词
NIT-1细胞; RNA干扰; 血管紧张素Ⅱ 1型受体; 基因沉默;

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