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应用DNA提取改良和二次聚合酶链反应技术检测乌头及其炮制品

         

摘要

[目的]筛选适用于9种乌头属植物根茎炮制前后DNA提取的方法.[方法]采用基于十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、十二烷基硫酸钠(SDS)法的12种改良方法提取9种乌头属植物根茎炮制前后DNA,考察提取缓冲液种类、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)添加、水浴时间、DNA沉降方式对乌头属植物根茎炮制前后DNA提取的影响,以及二次聚合酶链反应(PCR)技术对乌头炮制品ITS2片段浓度提高的影响.[结果]不同缓冲液与水浴时间互作提取DNA效应不同,2×CTAB(含2.5 mol/L NaCl)水浴3 h提取的9种乌头生品DNA的ITS2扩增效果最佳,2×CTAB(含1.4 mol/L NaCl)水浴3 h提取的9种乌头炮制品DNA的ITS2扩增效果最佳.添加PVP或添加PVP+改变DNA沉降方式对生品DNA提取影响不大,但对炮制品有明显的抑制作用.经过二次PCR可显著提高炮制品ITS2的扩增效率.[结论]提取缓冲液和水浴时间的有效互作提取DNA以及二次PCR技术的应用可提高乌头属植物根茎ITS2片段制备效率,为DNA条形码技术广泛应用于乌头属药材提供必要的技术支持.

著录项

  • 来源
    《广州中医药大学学报》 |2021年第2期|385-391|共7页
  • 作者单位

    云南省药物研究所 云南昆明 650111;

    云南白药集团创新研发中心 云南昆明 650111;

    云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室 云南昆明 650111;

    云南省药物研究所 云南昆明 650111;

    云南白药集团创新研发中心 云南昆明 650111;

    云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室 云南昆明 650111;

    云南省药物研究所 云南昆明 650111;

    云南白药集团创新研发中心 云南昆明 650111;

    云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室 云南昆明 650111;

    云南省药物研究所 云南昆明 650111;

    云南白药集团创新研发中心 云南昆明 650111;

    云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室 云南昆明 650111;

    云南省药物研究所 云南昆明 650111;

    云南白药集团创新研发中心 云南昆明 650111;

    云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室 云南昆明 650111;

    云南省药物研究所 云南昆明 650111;

    云南白药集团创新研发中心 云南昆明 650111;

    云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室 云南昆明 650111;

    云南省药物研究所 云南昆明 650111;

    云南白药集团创新研发中心 云南昆明 650111;

    云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室 云南昆明 650111;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 R285.2;
  • 关键词

    乌头属; 炮制; DNA提取; 二次PCR; ITS2;

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