HRP标记的二抗检测heme结合蛋白造成假阳性问题的探讨

张亚男; 张春晓; 陈晓波

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HRP标记的二抗检测heme结合蛋白造成假阳性问题的探讨

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为了验证对辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)作为二抗标记物在检测 heme结合蛋白时产生假阳性问题的推测,以菠菜细胞色素b6 f 复合体(Cyt b6f)和铁氧还蛋白-NADP+氧化还原酶(FNR)为检测对象(前者含有 heme 结合蛋白 Cyt f,后者不含 heme 基团),采用菠菜FNR一抗、HRP和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)标记的二抗,设计对比实验.结果表明,在使用 HRP标记的二抗体系中,Cyt f 不经一抗和二抗孵育即可显色,这是明显的假阳性;而在ALP标记的二抗体系中,Cyt f 条带不显色,只有 FNR 条带显色.在 western blot 实验中,如果被检测蛋白为heme结合蛋白或者混有少量 heme 结合蛋白,应避免采用 HRP 标记的二抗,建议使用ALP标记的二抗或者其他二抗产品;heme结合蛋白具有类似 HRP 的氧化还原酶活性,其本身可以和显色液反应,从而产生假阳性,干扰对实验结果的判断.

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来源
《河北科技大学学报》 |2019年第3期|273-278|共6页
作者
张亚男; 张春晓; 陈晓波;
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作者单位

河北科技大学生物科学与工程学院;

河北石家庄 050018;

河北科技大学生物科学与工程学院;

河北石家庄 050018;

河北科技大学生物科学与工程学院;

河北石家庄 050018;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类生物化学技术;过氧化氢酶和过氧化物酶;
关键词
植物生物化学; 蛋白免疫印迹杂交; 辣根过氧化物酶; heme结合蛋白; 假阳性;

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