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首页> 中文期刊> 《黑龙江八一农垦大学学报》 >牛病毒性腹泻/黏膜病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

牛病毒性腹泻/黏膜病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

         
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为建立一种检测牛病毒性腹泻、黏膜病病毒抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白并纯化,使用纯化后的蛋白作为包被抗原.确定最佳抗原包被浓度为6 μg·mL-1,最佳血清稀释度为1∶80,最佳包被液为碳酸缓冲液,最佳盐封闭液为5％脱脂乳,最佳血清作用时间为60 min,酶标抗体作用最佳浓度为1∶10 000;最佳底物作用时间为5 min,阳性临界值为D450nm≥0.282.与IDEXX的BVDV间接ELISA试剂盒比较,总符合率为91.5％,板内和板间重复性试验变异系数均小于10％.该方法与牛副流感病毒Ⅲ型、牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛冠状病毒阳性血清无交叉反应.因此,该ELISA诊断方法可用于大批量样本抗体水平监测和流行病学调查.

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