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PRRSV河南株ORF7基因的克隆表达及条件优化

         

摘要

Total RNA was extracted from the cell cultures of two Henan strains of porcine reproductive and respiration syndrome virus (PRRSV), HN07 -1 and HN07 -2,and the ORF7 gene of PRRSV was amplified by RT-PCR using specific primers designed according to the sequence of the nucleocapsid protein (N) gene of IAF - exp91. The PCR products were connected into pMD- 19T vector,cloned and sequenced. The results showed that the ORF7 genes of the two strains were same to each other,and the homology of ORF7 gene with HB- 4(hs),VR - 2332,and BJ -4 was 100%, 93.8% ,and 93.8% ,respectively. A prokaryotic expression vector pGEX - 6p - 1 containing ORF7 gene was constructed, transformed into E. coli BL21 and induced with IPTG. SDS- PAGE and Western - blot confirmed that the recombinant protein of 40 kD was successfully expressed in E. coli BL 21.%从猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)河南分离株(HN07-1、HN07-2)的细胞培养物中提取RNA,根据参考株IAF-exp91 N蛋白基因序列设计出2对引物,成功克隆出ORF7全长基因,并连接至pMD-19T栽体.基因测序结果表明,2株PRRSV河南分离株ORF7基因序列完全相同;该序列与HB-4(hs)同源性为100%,与标准美洲株VR-2332和我国早期分离的BJ-4株同源性为93.8%.将该基因亚克隆到原核表达栽体pGEX-6p-1后,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达条件进行优化.SDS-PAGE和Western-blot结果表明,成功表达了约40kD的融合蛋白;使用1.0mmol/L的IPTG在2×YT培养基中诱导8h可获得最大表达量.

著录项

  • 来源
    《河南农业科学》 |2011年第1期|136-140|共5页
  • 作者单位

    郑州大学生物工程系;

    河南;

    郑州;

    450001;

    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室;

    河南郑州;

    450002;

    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室;

    河南郑州;

    450002;

    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室;

    河南郑州;

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    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室;

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    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室;

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    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室;

    河南郑州;

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    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室;

    河南郑州;

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    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室;

    河南郑州;

    450002;

    郑州大学生物工程系;

    河南;

    郑州;

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    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室;

    河南郑州;

    450002;

    郑州大学生物工程系;

    河南;

    郑州;

    450001;

    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室;

    河南郑州;

    450002;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 家畜病毒学;
  • 关键词

    猪繁殖与呼吸综合征; 反转录; 克隆; 表达; Western-blot; 美洲型;

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