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GFP基因在软枣猕猴桃愈伤组织原生质体中瞬间表达的初步研究

         

摘要

用PEG介导法对游离出来的软枣猕猴桃原生质体进行遗传转化,成功地将绿色荧光蛋白(GFP)基因导入了原生质体,并获得了瞬间表达.结果表明,影响GFP基因转化的因素主要是材料的生理状态,PEG的种类和浓度;适宜的转化条件和方法为,将从白色、较为疏松愈伤组织中游离的原生质体,悬浮到质量分数为13%甘露醇的洗液(CPW13)中,置于45 ℃水浴中热激5 min,再放在冰浴中迅速冷却;加入质粒,轻轻混匀后静止10 min;逐滴加入质量分数40%PEG6000介导转化,终浓度为100 g*L-1,在室温下放置20 min;逐滴加入CPW13稀释转化后的原生质体,以避免PEG浓度剧烈变化造成细胞膜破裂.

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