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鸡传染性囊病双抗体夹心Dot-ELISA诊断法的建立及应用

         

摘要

本研究以醋酸纤维素膜作为固相载体、辣根过氧化物酶标记鸡抗传染性囊病病毒抗体(IBD—IgG)、饱和联苯胺为底物显色建立了一种简便、快速、敏感的鸡传染性囊病双抗体夹心Dot—ELISA诊断法。经方阵实验确定最佳反应条件为:IgG的包被液为0.05MpH9.6碳酸缓冲液,包被浓度为1:50;酶标抗体的工作浓度为1:100;洗涤液为含0.05%吐温—80的0.02MpH7.4磷酸缓冲液,封闭液为含0.2%明胶的洗涤液,封闭时间,抗原及酶标抗体的作用时间均为37℃30分钟。应用本方法和琼扩试验一同检测20份已知阳性病料,120份待检病料和胚毒尿囊液、10份正常鸡样品进行对比试验,结果表明Dot—ELISA阳性率为90%,而AGP只有40%;凡AGP阳性者,Dot-ELISA匀呈强阳性,而在Dot—ELISA阳性样品中,只有44%AGP阳性,其敏感度比AGP高100倍。

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