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基于核酸适配体的荧光传感器检测赭曲霉毒素A

         

摘要

为了实现对食品中赭曲霉毒素A的快速检测,利用带有羧基荧光基团(FAM)的核酸适配体(Apt-FAM)与带有黑洞猝灭基团(BHQ1)的互补链cDNA-BHQ1,构建了简单、快速检测食品中赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的荧光传感器。研究结果表明:当OTA不存在时,Apt-FAM通过碱基互补配对与cDNA-BHQ1结合,荧光基团FAM靠近猝灭基团BHQ1,通过荧光共振能量转移作用抑制荧光基团FAM的信号;当OTA存在时,OTA与Apt-FAM结合形成G-四链体单链结构,G-四链体远离cDNA-BHQ1,荧光信号增强。通过试验条件的优化,选择最优检测条件:互补链为cDNA1-BHQ1、孵育时间为60 min、cDNA与Apt用量比为1∶1、反应体系的pH值为7.4。在最优检测条件下,传感器检测OTA的线性范围为0.5~100 ng/mL,线性方程为y=31.934 98+41.714 94lg(C_(OTA)),R^(2)=0.997,最低检出限为0.13 ng/mL。利用该传感器检测玉米粉和葡萄酒样品中的OTA,平均回收率分别为100.0%~102.0%和98.0%~102.2%。研究构建的荧光传感器成功用于快速检测食品中OTA,为快速检测食品中真菌毒素提供了参考。

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