卡波氏肉瘤病毒K9基因重组慢病毒表达载体的构建及其编码蛋白功能初探

尚元翠; 卢春; 秦娣

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目的:构建卡波氏肉瘤病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)K9基因的重组慢病毒载体,并探究K9基因编码的病毒干扰素调节因子1(viral IFN regulatory factor 1,v IRF1)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖的影响。方法:根据K9基因的核酸序列设计聚合酶链式反应(PCR)的上下游引物。以实验室已有的真核表达载体p CI-K9-Flag为模板,PCR扩增K9基因序列。PCR产物经限制性内切酶双酶切后插入慢病毒载体p HAGE-CMVMCS-Izs-Green(简称p HAGE)中,构建重组慢病毒质粒p HAGE-K9。将p HAGE-K9质粒与包膜质粒p MD2.G、包装质粒ps PAX2共同转染人胚肾上皮细胞(293 T细胞),包装K9基因的重组慢病毒。采用病毒梯度稀释法测定病毒滴度。慢病毒感染HUVECs后,观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,蛋白质印迹法检测HUVECs中K9编码的v IRF1蛋白的表达。采用流式分选技术获得稳定表达v IRF1蛋白的HUVECs。运用细胞增殖实验检测v IRF1对HUVECs增殖的影响。结果:核酸序列测定结果表明,重组慢病毒质粒p HAGE-K9构建成功。蛋白质印迹结果显示,K9基因重组慢病毒感染HUVECs后其编码蛋白成功表达。细胞增殖实验结果表明,稳定表达v IRF1的HUVECs增殖能力显著强于对照组。结论:KSHV K9基因编码的v IRF1能够促进HUVECs的增殖。

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来源
《江苏大学学报：医学版》 |2016年第6期|461-465|共5页
作者
尚元翠; 卢春; 秦娣;
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作者单位

南京医科大学病原生物学系;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类人体病毒学（致病病毒）;
关键词
卡波氏肉瘤病毒; K9; 基因; 病毒干扰素调节因子; 1; 慢病毒; 人脐静脉血管内皮细胞; 细胞增殖;

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