构建并检测以人U6 snRNA为启动子的RNA干扰质粒载体

夏春祥; 解满霞; 楚莉辉

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构建并检测以人U6 snRNA为启动子的RNA干扰质粒载体

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目的:应用人U6启动子构建RNA干扰载体pUC19NU,具有新霉素抗性且能够在真核细胞中复制,成为基因功能和基因治疗研究等领域的RNA i技术的工具。方法:通过PCR从人类基因组中得到人U6 snRNA启动子,并针对增强绿色荧光蛋白(EGFP)和p53蛋白的基因,分别设计了两段可以转录出短发夹环状RNA的DNA模板序列,连入pUC19中,构建出RNA干扰质粒pUC19NU,分别得到质粒载体pUC19NUE和pUC19NUP。结果:以EGFP和p53为靶基因的干扰实验证明,两种质粒载体分别转染HeLa细胞和KMB-17细胞,两种蛋白的表达皆受到有效抑制。结论:该质粒能够有效地干扰相应内源性和外源性靶基因的表达,可以用于RNA i技术的研究。

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来源
《江苏大学学报：医学版》 |2006年第5期|380-384|共6页
作者
夏春祥; 解满霞; 楚莉辉;
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作者单位

淮安市第四人民医院检验医学中心淮安市肝炎研究所分子病毒实验室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 R394.3;
关键词
RNA干扰; U6启动子; 绿色增强荧光蛋白; p53; 质粒;

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