定点突变对Procaspase-8 DEDs蛋白溶解性的影响

庞威威; 孔庆宏; 王冠林; 张宽仁

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定点突变对Procaspase-8 DEDs蛋白溶解性的影响

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在进行人源Procaspase-8 DEDs(也称为Caspase-8 DEDs)蛋白研究时,采用定点突变的方法对野生型(WT)Procaspase-8 DEDs蛋白编码基因的三个位点F122、L123、I128进行突变,并将获得的突变体基因片段构建入表达载体p ET-28a(+)和p CMV6-AC-GFP中;在原核细胞中转化入E.Coli Transetta(DE3),获得具有三突变(F122G/L123G/I128D)的表达菌株,当以IPTG诱导目的基因表达时,发现突变蛋白(Procaspase-8 DEDsF122G/L123G/I128D)的可溶性表达显著提高;当真核质粒转染细胞HCT116时,与野生型Procaspase-8 DEDs蛋白相比,突变型蛋白不利于死亡效应纤丝(Death Effector Filaments,DEFs)的形成.结果表明:定点突变能提高Procaspase-8DEDsF122G/L123G/I128D蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达,并经Ni^(2+)蛋白纯化柱和蛋白浓缩柱作用可富集可溶性目的蛋白;同时,在真核细胞中改善了死亡效应纤丝形成问题.本文研究有助于Procaspase-8 DEDs蛋白的体外功能研究以及相关细胞系构建.

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来源
《昆明理工大学学报：自然科学版》 |2017年第6期|75-80|共6页
作者
庞威威; 孔庆宏; 王冠林; 张宽仁;
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作者单位

昆明理工大学生命科学与技术学院;

云南昆明650500;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类蛋白质;
关键词
半胱氨酸蛋白酶-8; 定点突变; 诱导表达; 纯化; 死亡效应纤丝;

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