IRE1结构域分析及截短型载体的构建和表达

刘平; 李祥柱; 赵文君; 刘艳娜; 周菁华; 郭风劲

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IRE1结构域分析及截短型载体的构建和表达

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目的克隆IRE1基因,根据IRE1基因不同生物学功能的4个结构域构建截短型真核表达载体,并用生物信息学方法对其蛋白产物进行分析.方法应用PCR重组技术,以pCMV-IRE1为模板扩增IRE1全长及4个截短型片段,利用DNA重组技术将片段定向插入到真核表达载体pcDNA3.1（-）中,经酶切及测序鉴定后,免疫印迹检测各重组载体在细胞中的表达,并利用SWISS-MODEL在线软件预测其蛋白结构.结果酶切鉴定及Western 印迹结果表明成功构建了IRE1全长及每一种截短型片段的真核表达载体：pcDNA3.1（-）-IRE1（pIRE1）,pcDNA3.1（-）-IRE1-NLDP（pNLD）,pcDNA3.1（-）-IRE1-KinaseP（pKinase）,pcDNA3.1（-）-IRE1-R＋L（pR＋L）,pcDNA3.1（-）-IRE1-RNase（pRNase）.结论 IRE1及其截短型真核表达载体的成功构建和表达,为进一步研究IRE1各个结构域的生物学功能奠定了基础.

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来源
《医学分子生物学杂志》 |2011年第2期|108-113|共6页
作者
刘平; 李祥柱; 赵文君; 刘艳娜; 周菁华; 郭风劲;
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作者单位

重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室;

重庆市400016;

重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心;

重庆市400016;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
内质网应激; 需肌醇酶; 结构域; 载体构建;

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