小鼠Derlin-1重组腺病毒的构建及在胰岛中的表达鉴定

刘佳; 汪彦阳; 吴倜珺; 单伟; 韩晓

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小鼠Derlin-1重组腺病毒的构建及在胰岛中的表达鉴定

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目的构建小鼠Derlin-1重组腺病毒载体，包装、纯化并检测病毒滴度，观察重组腺病毒在小鼠胰岛中的表达。方法设计合成针对小鼠Derlin-1基因cds区的引物序列，采用PCR的方法以小鼠胰岛cD．NA为模板，扩增目的基因Derlin-1。经XbaⅠ和HindⅢ双酶切后，克隆至AdTrack-CMV穿梭质粒上，与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组，通过脂质体将正确的重组体包裹并转染293A细胞，在其中包装扩增病毒。利用穿梭质粒中所带绿色荧光蛋白GFP，对病毒滴度和感染效率进行检测。最终得到pAd-Derlin-1重组腺病毒载体，体外转染小鼠胰岛，使用Western印迹法检测Derlin-1蛋白表达水平。结果酶切鉴定证明Derlin-1基因重组腺病毒构建成功，病毒有较强感染能力。并验证其在小鼠胰岛中成功过表达。结论应用同源重组方法成功构建了含小鼠Derlin-1基因的重组腺病毒。为进一步研究Derlin-1在胰岛β细胞中的作用奠定了基础。

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来源
《医学分子生物学杂志》 |2014年第2期|90-93|共4页
作者
刘佳; 汪彦阳; 吴倜珺; 单伟; 韩晓;
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作者单位

南京医科大学江苏省人类功能基因组学重点实验室;

南京市210029;

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正文语种 chi
中图分类 R349.7;
关键词
Derlin-1基因; 重组腺病毒; 糖尿病; 胰岛β细胞;

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