HCVIRES特异性抑制性RNA二级结构模拟及自剪切转录载体构建

梁雪松; 周永兴; 连建奇; 郝春秋; 王临旭

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HCVIRES特异性抑制性RNA二级结构模拟及自剪切转录载体构建

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目的 :构建可保证HCVIRES特异性抑制性RNA(IRNA)序列完整性的转录载体。　方法 :应用计算机软件模拟IRNA二级结构 ;体外化学合成IRNA及其互补体的cDNA ,以AatⅡ和XbaⅠ双酶切后克隆入具自剪切作用的顺式核酶载体pGEMRz中 ;应用酶切方法、PCR和测序法对重组载体进行三重鉴定 ;最后对重组体进行体外转录。　结果 :计算机模拟发现HCVIRES特异性IRNA二级结构包括两个环、一个茎状结构和一个膨出 ,在其序列两端加3～ 5个碱基不会改变其二级结构 ,而缺失 3～ 5个碱基却会明显改变其结构。经三重鉴定证实 ,目的序列被正确地克隆入质粒pGEMRz,并经体外转录得到约 70个碱基大小的IRNA。　结论 :本研究构建转录载体pGRz IRNA可保证IRNA序列的完整性。

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来源
《医学研究与战创伤救治》 |2002年第3期|189-192|共4页
作者
梁雪松; 周永兴; 连建奇; 郝春秋; 王临旭;
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作者单位

第四军医大学唐都医院感染病科;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 R373.21;
关键词
HCV; IRES; 抑制性RNA; 体外转录;

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