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二苯乙烯苷抑制肺动脉平滑肌细胞增殖的机制研究

         
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目的 建立PDGF-BB诱导的原代大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary vascular smooth muscle cells,PASMCs)增殖的细胞模型,并探讨二苯乙烯苷(2,3,5,4-tetrahydroxyl diphenylethylene-2-o-glucoside,TSG)对PASMCs增殖的影响及其机制,为肺血管重构防治寻找新药物.方法 采用酶消化法分离培养大鼠原代PASMCs,通过20ng/ml PDGF-BB诱导PASMCs增殖建立细胞模型,采用1 ～ 100μmol/L TSG干预PDGF-BB诱导的PASMCs增殖,通过CCK-8检测PASMCs增殖及TSG的细胞毒作用,BRDU检测DNA的合成,流式细胞仪分析细胞周期,实时定量PCR(RT-PCR)检测CyclinD1、CyclinE、CDK2/4/6 mRNA的表达,Western blot法检测总的和磷酸化AKT/GSK3β的表达.结果 CCK-8检测结果表明TSG抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增殖及DNA合成具有浓度依赖性,并且实验浓度的TSG对PASMCs无明显毒性不良反应;流式细胞仪分析结果表明TSG能够阻滞细胞周期于G0/G1～S期,RT-PCR结果表明TSG能够抑制CyclinD1、CyclinE、CDK2/4/6 mRNA的表达;Westernblot法检测结果表明TSG能够抑制AKT/GSK3β活化.结论 TSG通过阻滞细胞周期于G0/G1～S抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增殖.TSG抑制PASMCs增殖与抑制AKT/GSK3β信号通路的活化有关.

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