肠道病毒71型2C蛋白原核表达及抗体制备

郑方亮; 王励; 于亮; 郑振华; 郑才尚; 刘宏生

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肠道病毒71型(EV71)的非结构蛋白2C(P2C)在病毒复制周期中起着重要的作用,制备P2C的特异性抗体,对研究P2C的生物学功能以及EV71与宿主相互作用的具体机制有非常重要的意义.实验将2C基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达出重组蛋白rP2C,进一步优化原核表达条件,在温度为30℃,诱导剂IPTG浓度为1 mmol/L时,蛋白表达量最高,且主要以包涵体形式存在.直接将获得的rP2C通过SDS-PAGE分离后免疫新西兰兔,制备EV71病毒P2C的兔多克隆抗体.通过Westernblot检测,该抗体在1:10 000稀释比例下仍能很好地识别原核表达的rP2C.同时该抗体也能很好地检测到EV71感染RD细胞中的P2C.因此,实验制备出的抗P2C抗体特异性强、效价高,为后续P2C功能的研究以及EV71病毒检测提供了良好的材料.

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来源
《微生物学杂志》 |2014年第6期|10-14|共5页
作者
郑方亮; 王励; 于亮; 郑振华; 郑才尚; 刘宏生;
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作者单位

辽宁大学生命科学学院,辽宁沈阳110036;

辽宁大学生命科学学院,辽宁沈阳110036;

辽宁大学生命科学学院,辽宁沈阳110036;

中国科学院武汉病毒研究所病毒学国家重点实验室,湖北武汉430071;

中国科学院武汉病毒研究所病毒学国家重点实验室,湖北武汉430071;

辽宁大学生命科学学院,辽宁沈阳110036;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;肠道病毒与肝炎病毒;
关键词
EV71病毒; 2C蛋白; 原核表达; 多克隆抗体;

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