成熟志贺毒素全长与截短A亚单位在E.coli中的表达及纯化

喻华英; 高丰; 王景林

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应用PCR技术从Ⅰ型痢疾志贺菌(Shigella dysenteriae type Ⅰ)中,扩增出约895 bp的成熟ShT-A基因片段,克隆至pGEM-T载体申,经蓝白斑筛选、PCR和双酶切鉴定正确后,命名为pGEM-TA2.测序结果表明,ShT-A与GenBank中ShT-A序列完全一致.用BamHⅠ和Kpn Ⅰ双酶切克隆质粒,得到为895 bp成熟ShT-A与pQE30原核重组表达载体连接,构建原核重组表达质粒.经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳观察,没有目的蛋白表达.DNAsis软件分析ShT-A基因序列,发现513 bp处有HindⅢ位点,故以ShT-A上游引物的BamHⅠ和HindⅢ从pGEM-TA2切出一个513 bp的截短片段,重新插入pQE30表达载体,得到pQE30-A513重组表达质粒,转化E.coli M15,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳观察,在20 ku处出现1条特异性的表达蛋白带,与截短ShT-A513分子量相符,表达量约占菌体总蛋白的37.4%,表达形式为包涵体.为抗体的制备提供了必要的物质基础.

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来源
《微生物学杂志》 |2005年第5期|11-15|共5页
作者
喻华英; 高丰; 王景林;
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作者单位

新疆塔里木农垦大学,动科院,新疆,阿拉尔,843300;

长春解放军军需大学,吉林,长春,130062;

军事医学科学院,微生物流行病研究所,北京,100071;

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正文语种 chi
中图分类肠道杆菌;
关键词
志贺毒素A亚单位; 克隆; 表达; 纯化;

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