miR-1腺病毒载体的构建及表达分析

许旭东; 宋晓伟; 李青; 林丽; 袁文俊; 荆清; 秦永文

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目的构建并鉴定microRNA-1(miR-1) 的腺病毒表达载体.方法 PCR扩增含大鼠miR-1前体的DNA片断,并将其克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack.pAdTrack经Pme I酶切线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183菌中进行同源重组.重组质粒pAd-precusor-miR-1线性化后,转染293A细胞,进行病毒包装,得到重组腺病毒颗粒Ad-miR-1.Ad-miR-1与Ad-GFP病毒转染培养的乳鼠心肌细胞,通过实时荧光定量PCR方法检测miR-1的表达效率.结果基因测序及酶切鉴定证实重组Ad-precursor-miR-1腺病毒载体构建成功;腺病毒Ad-miR-1转染心肌细胞后,实时荧光定量PCR方法证实腺病毒Ad-miR-1能够显著提高心肌细胞内miR-1的表达水平.结论利用同源重组的方法构建的miR-1腺病毒能够提高心肌细胞内miR-1的表达水平.

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来源
《南昌大学学报（医学版）》 |2010年第8期|1-3,7|共4页
作者
许旭东; 宋晓伟; 李青; 林丽; 袁文俊; 荆清; 秦永文;
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作者单位

第二军医大学长海医院心血管内科,上海,200433;

第二军医大学长海医院心血管内科,上海,200433;

中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所,上海,200025;

第二军医大学生理学教研室,上海,200433;

第二军医大学生理学教研室,上海,200433;

第二军医大学长海医院心血管内科,上海,200433;

中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所,上海,200025;

第二军医大学长海医院心血管内科,上海,200433;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类心肌疾病;
关键词
心肌细胞; 腺病毒; microRNAs; miR-1;

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