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养阴活血方干预ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠DNA甲基化酶的研究

         
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目的从DNA甲基化角度观察养阴活血方及其功效单元干预动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)进程。方法ApoE-/-小鼠随机分为对照组、模型组、辛伐他汀组、养阴活血方组、养阴组、清热组和活血组。对照组小鼠给予普通饲料喂养,其余组小鼠均给予高脂饲料喂养。分别于第10、12、14、16、18周,对照组小鼠注射等体积无菌PBS,其余组腹腔注射10μg的LPS。灌胃给药与高脂饲料喂养同时进行,第20周检测。油红O染色观测小鼠主动脉斑块面积;生化试剂盒检测小鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C、non-HDL-C水平;HE冠脉染色观测小鼠冠脉管腔狭窄情况和管腔面积;qPCR检测小鼠脾脏/主动脉DNA甲基化酶Tet1、Tet2、Tet3、Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b mRNA表达;Western blot检测小鼠脾脏/主动脉DNA甲基化酶Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b蛋白表达;ELISA检测细胞因子IL-6、IL-2、TGF-β1的变化。结果与模型组相比,养阴活血方组能显著减少斑块面积并抑制冠脉狭窄(P<0.01),降低TG、LDL-C水平(P<0.01),升高HDL-C水平(P<0.05),降低脾脏Dnmt1和Dnmt3a蛋白表达(P<0.05),降低主动脉Dnmt1 mRNA、Dnmt3b mRNA(P<0.05,P<0.001)和主动脉Dnmt1、Dnmt3b蛋白表达(P<0.05),下调血清IL-6水平(P<0.05),上调TGF-β1水平(P<0.05)。与模型组比较,各功效单元组均不同程度减少斑块面积、调节血脂水平;养阴组降低脾脏Dnmt3b mRNA表达(P<0.05),降低主动脉Dnmt3b mRNA(P<0.001)和Dnmt3a蛋白(P<0.05)表达,升高TGF-β1水平(P<0.05);清热组降低脾脏Dnmt1蛋白表达(P<0.05),主动脉Dnmt1和Dnmt3b mRNA(P<0.05)和Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b蛋白表达(P<0.05),降低IL-6水平(P<0.05),增加TGF-β1水平(P<0.05);活血组降低主动脉Dnmt3a和Dnmt3b蛋白表达(P<0.05),降低IL-6水平(P<0.05)。结论养阴活血方通过调节血脂,降低DNA甲基化酶Dnmts的表达,改善炎症水平,从而有效减少高脂联合LPS注射诱发的ApoE-/-小鼠AS斑块的形成。

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