榛子胚珠发育相关基因ChARF1的原核表达及多克隆抗体制备

黄立龙; 魏珩; 王秋缘; 刘春明; 刘剑锋; 程云清

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为解析ChARF1基因在榛子胚珠发育中的调控作用,以平欧杂交榛(Corylus heterophylla×C.avellana)“达维”成熟期胚珠为实验材料,克隆了在榛子胚珠发育不同时期显著差异表达的ARF同源基因,构建了其原核表达载体,并制备了该蛋白的多隆抗体.结果表明:ChARF1与胡桃(Juglans regia)ARF(XM_035695460.1)参考序列亲缘关系最近,与拟南芥AtARF1/2和番茄SlARF2聚类于同一大进化枝.以ChARF1基因N端前380个氨基酸(N-380)特异序列构建pET-28a-SUMO-ChARF1(N-380)原核表达载体,诱导表达后获得了包涵体形式存在的相对分子质量为66 000的抗原蛋白,纯化后免疫2只实验级雄性日本大耳白兔,最终获得能够特异性检测抗原蛋白的ChARF1(N-380)多克隆抗体E7200和E7201,二者效价均达到1∶512 000.

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来源
《东北师大学报：自然科学版》 |2022年第2期|106-112|共7页
作者
黄立龙; 魏珩; 王秋缘; 刘春明; 刘剑锋; 程云清;
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作者单位

吉林师范大学吉林省植物资源科学与绿色生产重点实验室;

吉林师范大学生命科学学院;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类转化及克隆;榛子;
关键词
榛子; ARF; 原核表达; 多克隆抗体; Western Blot;

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