人PKM2基因克隆、表达及纯化的研究

王秋香; 刘会玲; 祝秉东; 李海红; 王千千; 王海琳

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人PKM2基因克隆、表达及纯化的研究

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目的:构建人PKM2(M2-type pyruvate kinase)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达,镍离子柱亲和层析法纯化融合蛋白.方法:用PCR方法从宫颈癌Hela细胞全基因组中扩增出目的基因PKM2,通过克隆载体pET30a(+)构建质粒载体pET30a(+)-PKM2.经双酶切和DNA测序证实正确后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化.结果:双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果和报道一致.经SDS-PAGE分析,纯化后的蛋白约在58 KDa位,条带单一,无杂带出现.结论:成功表达纯化了PKM2融合蛋白,为肿瘤疫苗研制和肿瘤标志物快速诊断的研究奠定基础.

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来源
《实用妇产科杂志》 |2013年第4期|270-273|共4页
作者
王秋香; 刘会玲; 祝秉东; 李海红; 王千千; 王海琳;
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作者单位

兰州大学第一临床医学院,甘肃兰州 730000;

甘肃省人民医院,甘肃兰州 730000;

兰州大学结核病研究中心,甘肃兰州 730000;

兰州大学第一临床医学院,甘肃兰州 730000;

兰州大学第一临床医学院,甘肃兰州 730000;

甘肃省人民医院,甘肃兰州 730000;

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正文语种 chi
中图分类子宫肿瘤;
关键词
PKM2; 克隆; 表达; 纯化;

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