抗鸡传染性支气管炎病毒单链抗体间接ELISA筛选方法的建立

赵蕾; 林源; 李本强; 朱建国

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抗鸡传染性支气管炎病毒单链抗体间接ELISA筛选方法的建立

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建立一种筛选特异性单链抗体的间接ELISA优化方法。用鸡传染性支气管炎病毒IBV-M41株接种SPF鸡胚,纯化后作为抗原包被96孔板进行间接ELISA,从本实验室构建的原核表达质粒pOPE101-XP-scFv/JM109(DE3)中筛选出针对IBV-M41株的scFv,并对各反应参数进行探索,优化筛选方法。通过敏感性实验、交叉性实验、重复性实验评估优化后的筛选方法。优化的反应条件为,包被抗原1:20稀释(61.36μg/mL),4℃包被过夜;2%脱脂奶粉37℃封闭1 h;含可溶性scFv的待测样品1:100稀释(142.7μg/mL),37℃作用2 h;MYC鼠单抗1:2 000稀释,37℃作用2 h;羊抗鼠抗抗体1:4 000稀释,37℃作用1 h。敏感性实验显示样品中的scFv浓度的最低检出量为17.83μg/mL;特异性实验显示筛选出的scFv只与IBV-M41株特异性结合;重复性实验的板间、板内变异系数分别为2.78%、2.56%。建立的筛选scFv的间接ELISA方法有较好的敏感性、特异性、稳定性,为scFv的深入研究奠定基础。

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来源
《上海交通大学学报：农业科学版》 |2011年第2期|64-68|共6页
作者
赵蕾; 林源; 李本强; 朱建国;
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作者单位

上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物重点实验室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类鸡;
关键词
单链抗体; 传染性支气管炎; 间接ELISA; 筛选;

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