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miR-214通过激活肝星状细胞促进肝纤维化进程

         

摘要

目的·探讨miR-214在肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)活化过程及肝纤维化进程中的生物学作用及其可能的作用机制。方法·采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测HSCs活化过程及CCl4诱导大鼠(肝纤维化模型)的纤维化进程中miR-214的表达。采用慢病毒转染法处理HSC-T6细胞,并将其分为miR-214过表达组、miR-214敲除组和阴性对照慢病毒组即mock组。采用qPCR和蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测各组1型胶原蛋白(collagen type 1,COL1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)等HSCs活化标志物的基因及蛋白表达水平,通过Transwell细胞迁移实验检测不同组细胞的迁移能力,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。通过双荧光素酶报告基因实验检测缺氧诱导因子-1α抑制剂(hypoxia-inducible factor-1αinhibitor,Hif1an)是否为miR-214的靶基因,而后采用qPCR和Western blotting分别检测3组细胞、原代HSCs活化过程及肝纤维化模型中HIF1AN的表达水平。结果·miR-214在HSCs活化过程和肝纤维化进程中表达显著增加(均P<0.05)。与mock组对比,miR-214过表达组的COL1及α-SMA的基因及蛋白表达增加,细胞迁移能力增强,细胞凋亡率降低(均P<0.05);miR-214敲除组的COL1及α-SMA表达下降,细胞迁移能力减弱(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,Hif1an为miR-214的靶基因。与mock组对比,miR-214过表达组中HIF1AN的基因及蛋白表达下降(均P<0.05),而miR-214敲除组中则增加(均P<0.05)。且在原代HSCs活化过程和肝纤维化进程中HIF1AN的表达下调(均P<0.05)。结论·miR-214可能通过靶向调控Hif1an促进HSCs的迁移及活化,继而促进肝纤维化进程,提示其或可作为治疗肝纤维化的新的标志物和潜在靶点。

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