两步融合PCR法构建烟曲霉ssk1基因敲除株

马彦; 岑雯; 刘昕; 冯文莉

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两步融合PCR法构建烟曲霉ssk1基因敲除株

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目的通过两步融合PCR法构建烟曲霉ssk1基因敲除株. 方法通过在ssk1基因上下游的侧翼序列设计引物时引入15 bp的融合片段的互补的同源区,使用两步融合PCR的方法将长度约为4.3 kb的目的片段融合扩增,并直接使用PCR产物通过传统的原生质体法进行烟曲霉的转化,得到转化子运用PCR和Southern blot进行相应的验证. 结果通过融合PCR法较快的得到大约4.3 kb的融合的目的基因片段,运用原生质体法成功进行了烟曲霉的转化,得到5个转化子.经过PCR和Southern blot经验证有4株是正确的转化子. 结论在合适的引物设计及适当的融合PCR反应条件下,两步融合PCR法是一种简单高效的构建烟曲霉基因敲除株的方法,值得推广.

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来源
《山西医科大学学报》 |2014年第4期|255-260|共6页
作者
马彦; 岑雯; 刘昕; 冯文莉;
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作者单位

山西医科大学第二临床医学院皮肤科,太原030001;

山西医科大学第二临床医学院皮肤科,太原030001;

山西医科大学第二临床医学院皮肤科,太原030001;

山西医科大学第二临床医学院皮肤科,太原030001;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类人体细胞学;
关键词
烟曲霉; ssk1; 融合PCR; 基因敲除;

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