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不同细胞标记物对大鼠牙髓干细胞体外标记的生物学影响

         

摘要

目的 通过体外实验,对比氯甲基苯甲酰氨(CM-DiI)和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)这两种不同细胞标记物对大鼠牙髓干细胞生物学性能的影响,为需要进行细胞标记的实验研究提供理论参考依据.方法 采用酶解组织块法培养大鼠牙髓细胞并对其进行纯化,通过免疫组化鉴定细胞来源,并进行细胞体外多向诱导分化能力实验.利用5μg/ml浓度的CM-DiI和DAPI对第3代大鼠牙髓干细胞进行体外标记,通过比较细胞增殖情况以及细胞乳酸脱氢酶释放率,评价标记后细胞生物学状态.结果 利用酶解组织块法可获得克隆集落状生长的大鼠牙髓细胞.免疫组化法确定细胞为间充质来源,且具有向脂肪细胞、成骨细胞以及成牙本质细胞分化的潜能.CM-DiI标记后细胞膜及核膜均呈现出红色荧光,DAPI则细胞核蓝染.与未进行细胞标记比较,CM-DiI和DAPI标记后细胞形态、上清液乳酸脱氢酶含量及CCK-8值均无明显变化,两组差异无统计学意义.结论 CM-DiI和DAPI操作简便、染色速度快,都可用于标记大鼠牙髓干细胞.相较DAPI而言,CM-DiI对大鼠牙髓干细胞的细胞毒性更小.

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