目的探讨端粒酶新核心亚单位WD40-encoding RNA antisense to p53(WRAP53β)与头颈鳞癌(squamous cell carcinoma of the head and neck,HNSC)的临床、基因组和免疫浸润特征的关系,寻求HNSC的潜在靶向联合治疗方法。方法采用TIMER在线模块预测WRAP53β表达与TCGA队列中头颈肿瘤的临床特征、癌基因或免疫浸润之间的关系,TISCH网站分析其在单细胞水平的表达,通过CARE软件分析靶向WRAP53β的小分子抑制剂。体外实验验证中,合成sh WRAP53β序列的重组慢病毒颗粒,构建稳定表达sh WRAP53β的口腔鳞癌Cal27细胞(sh WRAP53β组),并设置两个对照组(shNC组:Cal27细胞加入含非特异性对照序列的慢病毒颗粒,Con组:未处理的Cal27细胞);MTT法检测3组细胞的增殖能力,细胞免疫荧光检测进一步定性检测sh WRAP53β组和shNC组细胞中P53蛋白的表达;Western blot检测第18、23、28代sh WRAP53β组和shNC组细胞的WRAP53β和DNA损伤蛋白γ-H2AX的表达。最后,收集口腔鳞癌病例样本13例,口腔黏膜炎性病例样本7例,通过免疫组化验证口腔鳞癌临床标本中WRAP53β和γ-H2AX的表达情况。结果TIMER分析发现WRAP53β表达在HNSC中较正常组织显著高表达。WRAP53β基因水平与p53通路基因如CCNB1、CCNB2及CDK1呈显著正相关,与HPV阳性的头颈肿瘤炎症因子IFN-γ、IL-23A呈正相关,而与IL-1A、IL-6呈负相关,但与浸润免疫细胞无显著相关。TISCH单细胞测序数据集同样显示该基因在恶性细胞中呈高表达,在免疫细胞中表达水平极低或无表达。CARE评分预测对WRAP53β共抑制效果最强的药物为靶向ATM、CDK1和MDM4的抑制剂。体外细胞实验证实,与对照组相比,sh WRAP53β组Cal27细胞的第5天到第7天的增殖能力下降(P<0.05),P53表达降低。Western blot检测示,与对照组相比,sh WRAP53β组WRAP53β的表达水平在第18、23、28代均降低(P<0.05),γ-H2AX表达仅在第18、28代降低(P<0.05)。临床标本显示口腔鳞癌组织中γ-H2AX的阳性表达检出率高(12/13),口腔黏膜炎样本未检出WRAP53β阳性表达(0/7)。结论WRAP53β在HSNC中呈高表达水平,且与p53通路基因显著相关。ATM、CDK1和MDM4抑制剂可能是WRAP53β的潜在共抑制药物。干扰WRAP53β可能导致DNA损伤降低,从而具有对HNSC的治疗潜力。
展开▼
